文献类型: 中文期刊
第一作者: 王笑梅
作者: 王笑梅;王牟平;高宏雷;付朝阳;曾祥伟;张守发
作者机构:
关键词: 传染性法氏囊病毒VP2;酵母细胞;基因表达;免疫原性;特异性抗体;传染性法氏囊病;鸡
期刊名称: 中国农业科学
ISSN: 0578-1752
年卷期: 2003 年 36 卷 4 期
页码: 443-447
收录情况: CSCD
摘要: 应用Pichia酵母表达系统高效表达了传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2基因片段。首先用OLIGO设计1对引物P5、P6,以插入IBDVVP2基因的pUC19为模板,扩增出带有终止密码子的1.5kb片段,将此片段正向亚克隆到pPICZA队表达载体上,将构建好的载体pPICVP2用SacI内切酶线性化后,转染酵母Pichia pastoris GS115细胞,经PCR鉴定,筛选出50多个重组子。分别用甲醇诱导后,经SDS-PAGE凝胶电泳、琼脂扩散试验、Dot-ELISA检测,得到9个不同程度表达41ku VP2活性蛋白的阳性重组子。经凝胶薄层扫描仪分析,表达蛋白占酵母细胞总蛋白的最高比率为16%,表达量为0.6208g·L^-1。表达产物免疫SPF鸡可诱导产生特异性抗体,并能保护鸡抵抗起强毒致死性攻击,具有良好的免疫原性。
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