山羊痘病毒RPO30基因绿色荧光蛋白质粒的构建及融合表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵志荀

作者： 赵志荀;吴国华;颜新敏;崔力凡;李健;朱海霞;张强

作者机构：

关键词： 山羊痘病毒;RPO30基因;增强型绿色荧光蛋白;融合表达

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2011 年 01 期

页码： 48-52

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了研究针对山羊痘病毒RPO30的siRNAs的干扰效果,构建了RPO30基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的融合表达质粒,并在BHK-21细胞中表达。通过对RPO30基因进行PCR扩增,克隆入表达载体pEGFP-N1,并进行双酶切及测序鉴定;将阳性重组质粒转染BHK-21细胞,检测绿色荧光蛋白的表达和RPO30基因的转录水平。结果显示,获得的目的基因片段大小与预期结果相符,该基因与Gen-Bank数据库中RPO30基因序列的同源性为97%。荧光显微镜和流式细胞仪均检测到细胞内绿色荧光蛋白的表达,转染后第48小时,阳性细胞率达到80.1%;经RT-PCR检测,细胞内有RPO30基因的转录。证实,已成功构建了RPO30基因与EGFP基因的融合表达质粒,并在BHK-21细胞中获得了表达。

分类号： S852.659.1

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