猪胚胎干细胞培养、分离和传代

文献类型： 中文期刊

第一作者： 董晓

作者： 董晓;冯书堂;王占贺;王端云;郑行

作者机构：

关键词： 猪;胚胎干细胞;生长因子

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2003 年 11 卷 03 期

页码： 263-267

收录情况： CSCD

摘要： 利用五指山小型猪近交系不同发育阶段的早期胚胎为材料,探索猪胚胎干细胞(embryonicstemcells,ES)培养、分离、传代的影响因素,以选择猪胚胎干细胞建系的适宜条件。收集五指山猪第5～10 d胚胎(配种当天记为0 d),以STO细胞[STO细胞是来自SIM小鼠(S)胚胎对硫代鸟嘌呤(thioguanine,T)和乌本苷(ouabain,O)有抗性的成纤维细胞系]为饲养层,分别采用两种培养液:杜氏培养液(Dulbecco'smodifiedeaglemedium,DMEM)+10%胎牛血清(fetalbovineserum,FBS)+10%新生牛血清(newbornbovineserum,NBS)+1000IU/mL白血病抑制因子(leukemiainhibitoryfactor,LIF)+30ng/mL干细胞生长因子(stemcellgrowthfactor,SCF)+20ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)或DMEM+10%NBS+10%FBS+1000IU/mLLIF+30ng/mLSCF。比较发现,培养液中是否加入bFGF对胚胎干细胞的培养无显著影响;实验共收集胚胎124枚,其中D5～6胚胎18枚,胚胎贴壁率为68.8%,内细胞团出现率为6.3%,未能传代;收集D7孵化囊胚27枚,贴壁率为100%,内细胞团出现率为38.9%,传代1次失败;D9胚胎18枚,贴壁率为100%,传代后ES细胞生长较缓慢;收集D10胚胎52枚,胚胎贴壁率为100%,传代率为100%,传代后可出现ES细胞克隆点;实验过程中比较了胚径对干细胞培养的影响,

分类号： S814

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