适用于RPA-LFD技术检测对虾肝胰腺DNA样品的快速制备试剂研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 姚梦丽

作者： 姚梦丽;白昌明;王崇明;辛鲁生

作者机构：

关键词： 核酸释放剂;重组酶聚合酶扩增(RPA);侧流层析试纸条(LFD);虾肝胰腺;病原快速检测

期刊名称： 渔业科学进展

ISSN： 2095-9869

年卷期： 2024 年 004 期

页码： 166-174

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为摆脱常规核酸样品提取步骤繁琐、耗时等问题，实现真正的现场快速检测，本研究致力于研制和优化一种对虾肝胰腺中DNA样品的核酸快速制备试剂，即核酸释放剂，适用于重组酶聚合酶扩增技术(recombinasepolymeraseamplication,RPA)与侧向流层析试纸条技术(lateralflow dipstick, LFD)结合的RPA-LFD技术检测。实验优选20～100 mmol/L Tris-HCl、50～250 mmol/L KCl、0.01%～0.10%十二烷基硫酸锂(LDS)、0.5%～2.0%聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)、1～5mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EGTA2Na)、0.5～5.0 mmol/L牛血清白蛋白(BSA)、1～5 mg/mL明胶、0.01%～0.10%海藻糖、1%～5%甜菜碱等配制成核酸释放剂。以对虾肝肠孢虫(Enterocytozoonhepatopenaei,EHP)阳性样本和阴性样本对核酸释放剂各组分间配比进行优化，采集绿豆大小的对虾肝胰腺组织加入100μL核酸释放剂，100℃加热3 min，取上清液进行RPA-LFD反应，测试各组分不同浓度配比；并以对虾急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND)阳性样品及阴性样品作为检测模板对优化后核酸释放剂再次验证。结果显示，核酸释放剂的各组分最佳配比为100 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L KCl、0.02%LDS、0.5%Triton X-100、1 mmol/L EGTA2Na、0.05%海藻糖、1 mg/mL明胶、0.5 mmol/L BSA、2%甜菜碱。RPA-LFD方法检测可显著区分阳性和阴性样品。本研究优化的核酸释放剂，适用于RPA-LFD检测对虾肝胰腺病原DNA样品的制备，有效避免了常规DNA样品繁琐、耗时的制备步骤，极大地提高了核酸水平病原检测效率。

分类号： S945.46

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