牡蛎疱疹病毒结构蛋白真核表达系统构建及多聚化特性

文献类型： 中文期刊

第一作者： 曹书华

作者： 曹书华;魏茂乐;李永仁;黄博闻;辛鲁生;白昌明;王崇明

作者机构： 天津农学院水产学院;中国水产科学研究院黄海水产研究所

关键词： 牡蛎疱疹病毒;核衣壳蛋白;真核表达系统;蛋白多聚化

期刊名称： 水产学报

ISSN： 1000-0615

年卷期： 2024 年 005 期

页码： 65-74

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 牡蛎疱疹病毒（OsHV-1）在全球范围内导致牡蛎、扇贝与蚶类的大规模死亡，成为双壳贝类养殖产业的重要威胁。为了解OsHV-1的结构与致病机制。本研究利用人胚胎肾细胞（HEK293t），构建OsHV-1主要核衣壳蛋白（ORF104和ORF33）的真核表达系统，并对ORF104和ORF33潜在相互作用进行分析。实验首先通过特异性PCR扩增技术得到orf 104和orf 33的基因序列，根据其编码蛋白的理化性质、跨膜区与三维结构等生物信息学分析结果，选择pCDNA3.1（+）构建两种基因的重组表达质粒。重组质粒经大肠杆菌扩增、提取后，利用转染试剂Lipo8000?将pCDNA3.1（+）-orf 104与pCDNA3.1（+）-orf 33分别单独或共转染至HEK293t。然后，将转染后的细胞培养18 h后裂解收集蛋白。最后利用蛋白免疫印迹（Western blot,WB）与负染电镜检测两种目的蛋白的表达情况。结果显示，实验成功构建了OsHV-1衣壳蛋白ORF104和ORF33的重组表达质粒载体，通过真核细胞表达得到大小约为135与35 ku的目的蛋白。研究表明，表达质粒可在真核表达系统中实现蛋白单独转染与共转染，共转染蛋白间可能存在相互作用的趋势并形成多聚体，其中，ORF33自身即可形成分子质量不同的多聚体。本研究首次利用真核表达系统开展OsHV-1关键结构蛋白的表达，为进一步开展该病毒结构蛋白功能与互作，以及病毒入侵机制研究奠定基础。

分类号： S944.41

  • 相关文献

[1]外源基因在甲醇酵母Pichia pastoris中的表达策略. 钱平,李祥敏,仇华吉,陈焕春. 2002

[2]抗Bt(Cry1B)毒素单链抗体在sf9昆虫细胞中的表达及活性测定. 徐重新,张霄,张存政,刘媛,谢雅晶,黄鹰,刘贤金. 2013

[3]基因表达系统研究进展. 孙柏欣,刘长远,陈彦,赵华,赵彤华,李柏宏. 2008

[4]猪圆环病毒2型结构蛋白Cap在果蝇S2细胞中稳定表达与鉴定的研究. 马凯凯,张琦,胡高维,常兴妮,杨建设,丁艳平,李志勇. 2017

[5]牡蛎疱疹病毒对魁蚶的致病性. 汪清晨,白昌明,张天文,王崇明,邱兆星,黄健. 2016

[6]牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)间接原位杂交PCR检测方法的建立与初步应用. 李亚楠,白昌明,刘金兰,辛鲁生,李晨,刘莉,黄博闻,魏智薪,王崇明. 2019

[7]基于原位LAMP技术的牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)易感宿主调查. 张翔,谷莉,郑玉东,李晨,白昌明,辛鲁生,王崇明,刘金兰. 2023

[8]基于长片段PCR扩增的牡蛎疱疹病毒基因组高通量测序. 史杰,白昌明,李晨,蔡生力,王崇明. 2018

[9]软体动物疱疹病毒及其对贝类养殖产业的危害. 白昌明,辛鲁生,王崇明. 2021

[10]牡蛎疱疹病毒囊膜蛋白(ORF111)的基因克隆及表达. 张淑敏,白昌明,辛鲁生,李亚楠,李晨,王崇明. 2020

[11]表达猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白重组禽痘病毒的构建. 智海东,王云峰,张晶,童光志,刘娣. 2004

[12]猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)福建分离株核衣壳蛋白基因(N)的克隆与表达分析. 王劭,朱小丽,朱晓琳,陈少莺,林锋强,陈仕龙,程晓霞,李兆龙,江斌. 2013

[13]猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白与感染细胞核磷蛋白的共定位分析. 吕茂杰,陈建飞,时洪艳,陈小金,范秀萍,申识川,冯力. 2011

[14]猪圆环病毒Ⅱ型修饰Cap蛋白基因的原核表达及纯化. 张锦秀,晁生玉,史利军,候绍华,李刚. 2009

[15]猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核可溶性表达和间接ELISA抗体检测方法的初步建立. 王俊,代军飞,马炳,丁耀忠,欧云文,刘永生,赵乐辉,张永光,张杰. 2018

[16]水禽源新城疫病毒HN糖蛋白在鸡体内演变. 丁铲,艾静,高勤学,陈鸿军,于圣青. 2007

[17]猪流行性腹泻病毒N蛋白与VeroE6核仁蛋白Fibrillarin的亚细胞定位分析. 石达,陈建飞,时洪艳,张志榜,冯力. 2011

[18]猪流行性腹泻病毒N蛋白与Vero E6核仁蛋白Fibrillarin的亚细胞定位分析. 石达,陈建飞,时洪艳,张志榜,冯力. 2011

[19]TGEV与PEDV核衣壳蛋白双价基因原核质粒的构建与表达. 王劭,陈少莺,朱小丽,程晓霞,林锋强,陈仕龙,李兆龙,朱晓琳. 2011

[20]猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白末端序列在病毒复制过程中的作用分析. 谭菲菲,韦祖樟,孙志,庄金山,袁世山. 2009

作者其他论文 更多>>

微信小程序