基于溶菌酶释放蛋白的猪链球菌间接ELISA抗体检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 乔宏

作者： 乔宏;龚俊;栾慧;李刚;刘思国;王春来

作者机构：

关键词： 猪链球菌;重组MRP蛋白;间接ELISA

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2020 年 009 期

页码： 912-917

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立猪链球菌病的快速诊断方法,本研究以纯化的原核表达的猪链球菌溶菌酶释放蛋白(MRP)为包被抗原,通过各反应条件的优化建立了检测猪链球菌(SS)血清抗体的间接ELISA方法.实验确定了最佳抗原包被浓度为0.05μg/mL、待检血清最佳稀释倍数为1:400、最佳封闭液为5%脱脂乳、兔抗猪HRP-IgG的最佳稀释倍数为1:15 000、抗体阴阳性临界值为0.226.特异性试验结果显示,利用本研究建立的ELISA方法检测100份背景清晰的阴性血清,检出其中97份阴性血清,3份阳性血清,特异性为97%.利用该ELISA方法检测副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀巴氏杆菌、大肠杆菌、猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清,结果显示均为阴性,而猪链球菌2型(SS2)、SS7、SS9以及SS12阳性血清的检测结果均为阳性,表明该方法具有较强的特异性.敏感性试验结果显示,利用本研究建立的ELISA方法检测50份背景明确的阳性血清,检出其中48份阳性血清,2份阴性血清,敏感性为96%.当SS2阳性血清稀释倍数达1:3 200时仍为阳性结果,表明该方法具有较高的敏感.重复性试验结果显示,该ELISA方法批内、批间最大变异系数分别为4.70%和7.20%,表明该方法的重复性较好.对100份临床猪血清样品检测结果显示,本研究建立的ELISA方法与玻片凝集试验的符合率为85.3%,符合率较高.对440份来自东北三省部分地区猪场的血清样品检测结果显示,SS抗体阳性率为27.7%(122/440).表明,东北三省部分地区猪场SS的感染率较高.上述结果表明,本研究建立的间接ELISA方法可以用于SS2、SS7、SS9以及SS12血清抗体的检测,为SS病的血清流行病学调查提供了可靠的技术手段.

分类号： S852.4

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