一株滑液囊支原体的分离鉴定及其磷酸丙糖异构酶(Tpi)和丙酮酸激酶(PK)抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 连丽燕

作者： 连丽燕;巩新民;郭龙宗;李玉燕;蒋蔚;陈兆国;祁克宗;魏晓峰;韩先干

作者机构： 中国农业科学院上海兽医研究所

关键词： 滑液囊支原体;磷酸丙糖异构酶;丙酮酸激酶;抗体制备

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2023 年 31 卷 005 期

页码： 55-63

摘要： 磷酸丙糖异构酶(Tpi)和丙酮酸激酶(PK)是滑液囊支原体(MS)进行糖酵解的关键酶,牛支原体和鸡毒支原体的Tpi(tpiA基因编码)和PK(pyk基因编码)位于细胞膜和细胞质上,参与对宿主细胞的粘附,而MS的tpiA和pyk分别编码Tpi和Pyk,目前尚未见相关研究.本研究首先对临床分离的MS分离株的生长特性进行研究,然后使用Overlap PCR对tpiA和pyk进行点突变扩增,分别将其克隆至pET-28a载体并在BL21(DE3)中表达,用获得的TpiA和Pyk蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体.结果表明:分离的MS分离株(MS-SD2020)最高生长滴定为109,在生长60 h时达到最高滴定;对tpiA和pyk的序列进行分析表明,其在不同MS中高度保守,并成功表达大小分别为35.28和63.36 kDa的TpiA和Pyk重组蛋白,免疫后制备的兔多克隆抗体效价分别为32 000和2 048 000,本研究为后续开展MS的TpiA和Pyk功能研究提供参考.

分类号： S858.31

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