敲除LTA4H基因的PK-15细胞系构建及其对口蹄疫病毒复制的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王家丽

作者： 王家丽;蒲秀瑛;杨帆;邵文华;黄梦瑶;曹伟军;郑海学;张伟

作者机构：

关键词： CRISPR/Cas9;白三烯A4水解酶;细胞系;口蹄疫病毒

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2024 年 003 期

页码： 733-744

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建白三烯A4水解酶（leukotriene A4 hydrolase,LTA4H）基因缺失的猪肾细胞系（porcine kidney-15,PK-15），探究LTA4H对口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus, FMDV）复制的影响，为开展LTA4H功能研究及调控病毒复制机制研究提供理论依据。【方法】设计2条针对猪LTA4H基因的引导RNA（small guide RNA,sgRNA），分别构建至载体pX459-puro-MCS中；将CRISPR重组质粒转染PK-15细胞，用嘌呤霉素（puromycin）抗生素筛选，并通过有限稀释法筛选单克隆细胞，之后通过Western blotting和测序检测LTA4H基因的敲除，获得LTA4H基因功能缺失细胞系。使用Western blotting、RT-qPCR及病毒滴度测定等方法检测敲除LTA4H基因后对FMDV复制及相关蛋白的表达情况。【结果】获得的单克隆敲除细胞系与野生型细胞相比，能够显著抑制FMDV复制。【结论】本研究成功构建了LTA4H基因敲除的PK-15细胞系，证明LTA4H对FMDV的复制具有促进作用，研究结果为后续LTA4H功能研究提供理论依据。

分类号： S852.65

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