文献类型： 中文期刊
第一作者： 钱微
作者： 钱微;刘燕;肖琛闻;韦强;季权安;鲍国连;姚火春
作者机构：
关键词： 兔支气管败血波氏杆菌;CyaA;荧光定量PCR;检测
期刊名称： 农业生物技术学报
ISSN： 1674-7968
年卷期： 2013 年 21 卷 004 期
页码： 498-504
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为了建立特异、敏感、快速检测兔支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究以Bb的毒力因子CyaA为目的基因设计特异性引物和探针,并将PCR扩增产物克隆测序,测序结果与GenBank上Bb的CyaA的同源性达100%.以阳性克隆质粒作为定量检测标准品建立标准曲线,以提取的Bb基因组DNA为模板,进行特异性、灵敏度和重复性实验.该方法对波氏杆菌基因组DNA检测最低限为0.32 pg,灵敏度是普通PCR的25倍,与临床常见细菌无交叉反应.对45份疑似感染兔波氏杆菌病料的检测表明,TaqMan荧光定量PCR和普通PCR检测阳性率分别为75.6%和66.7%,两者符合率88.2%.结果表明,建立的TaqMan荧光定量Bb检测方法具有较好的特异性、敏感性和重复性.该方法的建立对Bb的临床高效诊断,Bb的防控提供了有效手段.
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