香蕉条斑病毒云南分离物ORFⅠ的原核表达及其抗血清制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王健华

作者： 王健华;林湛松;张雨良;杨文君;余乃通;刘志昕

作者机构：

关键词： 香蕉条斑病毒;原核表达;抗血清

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2011 年 32 卷 07 期

页码： 1356-1359

收录情况： CSCD

摘要： 以连接在pMD-18T载体上的香蕉条斑病毒云南分离物(BSV)全基因组为模板,设计特异引物,PCR扩增获得ORFⅠ全长序列。目的片段及原核表达载体pET32(b)分别经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接构建重组质粒pET32-ORFⅠ,将鉴定为正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得原核表达OFRⅠ工程菌。工程菌在28℃条件下,用浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导表达6 h,离心收集菌液并超声波破碎,获得以含目的肽段的可溶性蛋白为主的融合蛋白。将融合蛋白通过Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,得到纯度较高的融合蛋白。以此蛋白为抗原免疫家兔,获得特异抗血清,该抗血清的效价达1∶100 000,Western Blot验证表明,抗血清的特异性较强。本研究为BSV的快速检测以及BSV编码蛋白的功能研究奠定了基础。

分类号： S436.68

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