来源于嗜热古细菌Pyrococcus furiosus乳糖酶基因的原核表达及酶学性质分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 段文娟

作者： 段文娟;杨娇艳;李卓夫;张伟;张志芳

作者机构：

关键词： 乳糖酶;嗜热古细菌;酶学性质;原核表达

期刊名称： 中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2008 年 10 卷 02 期

页码： 80-85

摘要： 以嗜热古细菌Pyrococcus furiosus的基因组DNA为模板,通过PCR克隆获得乳糖酶基因celB。将celB基因插入到表达载体pET-30 a(+)上构建原核重组表达质粒pET-celB,转化大肠杆菌BL21,阳性转化子在28℃下经IPTG诱导4 h后进行SDS-PAGE电泳和酶活性测定,结果表明celB基因在大肠杆菌中获得高效表达,乳糖酶基因celB表达的乳糖酶蛋白CELB分子质量约为58kDa。CELB是耐高温酶,其酶促反应最适温度为105℃,在95℃至110℃之间热稳定性较好;pH5.0时该乳糖酶水解活力最高,在pH5.0~10.0之间,pH稳定性较好,该酶对金属离子依赖性不强。

分类号： Q93

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