北京油鸡角膜缘干细胞分离培养及分化潜能研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 高也凡

作者： 高也凡;宋哈楠;王育南;吴月;牛锐利;宗宪春;关伟军

作者机构：

关键词： 北京油鸡;角膜缘干细胞;生物学特性;诱导分化

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2022 年 49 卷 009 期

页码： 3372-3381

收录情况： 北大核心

摘要： [目的]研究北京油鸡角膜缘干细胞(LSCs)分离、培养、鉴定及多向分化潜能等生物学特性.[方法]取10胚龄健康北京油鸡鸡胚的角膜缘,采用分散酶Ⅱ(dispase Ⅱ)联合胰蛋白酶二步法分离细胞,进行体外培养,绘制生长曲线,通过免疫荧光和RT-PCR技术鉴定LSCs特异性标志物细胞角蛋白3(CK3)、CK12、细胞周期调控蛋白p63、ATP结合盒转运蛋白(ABCG2)和细胞角蛋白19(CK19)的表达;通过成骨和成软骨诱导检测其多向分化潜能.[结果]获得的北京油鸡细胞折光性强、贴壁后呈多角形,生长曲线呈典型的S型,群体倍增时间(PDT)随着代次的升高逐渐下降;免疫荧光检测结果表明,分离的细胞中ABCG2、p63和CK19均呈阳性表达,CK3和CK12不表达;RT-PCR检测结果表明,分离的细胞表达p63、CK19、ABCG2,不表达CD45,说明分离的细胞为LSCs.LCSs成骨诱导分化后,可见被茜素红染色的矿化钙结节,RT-PCR检测结果表明其表达成骨关键基因骨桥蛋白(OPN)和Ⅰ 型胶原蛋白(Col-Ⅰ);成软骨诱导分化后,可见被阿利新蓝染色的软骨组织,RT-PCR检测结果表明其表达成软骨细胞关键基因转录因子性别决定区Y框9(SOX-9)和Ⅱ型胶原蛋白(Col-Ⅱ).[结论]本研究成功从10胚龄北京油鸡胚胎角膜缘中分离LSCs,且其具有良好的增殖活力及成骨和成软骨能力,结果可为禽类LSCs的资源保存研究提供参考.

分类号： S858.292

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