肠出血性大肠杆菌O157:H7Tir基因的克隆、表达及生物学活性研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张雪寒

作者： 张雪寒;何孔旺;茅爱华;周俊明;俞正玉;温立斌;倪艳秀;郭容利;吕立新

作者机构：

关键词： 肠出血性大肠杆菌O157:H7;转位紧密素受体;表达;粘附;A/E损伤;免疫保护

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2010 年 43 卷 12 期

页码： 2570-2577

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。选用HEp-2细胞进行粘附和粘附抑制试验,通过光镜、电镜和荧光显微镜进行观察。选用Balb/c小鼠进行免疫试验。【结果】成功获得高效表达重组Tir蛋白,并制备了兔源Tir多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应。表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对HEp-2细胞的粘附和A/E损伤。二免后Balb/c小鼠保护率高达75%以上。【结论】在大肠杆菌中成功克隆表达了Tir基因,所获重组Tir蛋白具有良好的抗原性,可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。

分类号： Q78

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