尼罗罗非鱼绿色荧光蛋白/GH融合表达载体的构建及其在NIH293T细胞中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王茂元

作者： 王茂元;张平;邹芝英;李大宇;杨弘

作者机构：

关键词： 尼罗罗非鱼;生长激素基因;荧光蛋白;转染

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2011 年 27 卷 07 期

页码： 385-389

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)脑垂体中分离其总RNA,经反转录合成为第一条cDNA链,再以第一条cDNA为模板,经过RT-PCR,克隆得到全长785bp的生长激素基因,序列分析表明:GH开放阅读框为615bp,共编码204个氨基酸;其中含有17个氨基酸的信号肽和187个氨基酸的成熟GH序列。同时将其插入到载体启动子下游,与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因融合,重组质粒经菌液PCR、限制性内切酶酶切和测序进行鉴定。通过脂质体转染分别将pEGFP-GH重组表达载体、pEGFP-N1转到293T细胞中,以检测尼罗罗非鱼GH基因表达的活性。结果显示,阳性对照组pEGFP-N1,有荧光表达的细胞占90%以上;pEGFP-GH可见绿色荧光,但是有荧光表达的细胞较少,强度较弱。上述试验现象表明,所获得的尼罗罗非鱼GH基因能够在真核细胞中表达,因此具有较好的表达活性。

分类号： Q786`S917.4

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