利用微滴数字PCR技术分析转基因大豆‘GE-J12’中外源基因的拷贝数

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵新

作者： 赵新;刘双;刘娜;李瑞环;曹英芳;兰青阔;王永

作者机构： 天津市农业科学院生物技术研究所;河北农业大学食品科技学院

关键词： 拷贝数;微滴数字PCR;转基因大豆;外源基因

期刊名称： 中国农业大学学报

ISSN： 1007-4333

年卷期： 2022 年 01 期

页码： 58-66

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为鉴定抗除草剂转基因大豆新品种‘GE-J12’的外源基因插入拷贝数,以该转化体的外源插入目的基因G2-EPSPS和GAT的序列、3′转化体特异性序列为靶序列,设计PCR扩增引物和TaqMan探针,并对引物探针特异性进行鉴定,同时以大豆内标基因Lectin为参照,建立微滴数字PCR拷贝数检测体系。特异性试验结果显示,只有以抗除草剂转基因大豆‘GE-J12’基因组DNA为模板才有扩增信号。以单株转基因大豆‘GE-J12’基因组DNA为模板,进行外源目的基因G2-EPSPS和GAT、3′转化体特异性序列的微滴数字PCR检测,转基因大豆‘GE-J12’的外源目的基因G2-EPSPS和GAT在基因组上的插入拷贝数均值分别为0.99和1.01。同时3′转化体特异性序列的拷贝数均值为1.00,验证单株转基因大豆‘GE-J12’为纯合子,因此鉴定该单株转基因大豆‘GE-J12’的外源基因在大豆基因组上为单拷贝插入,同时与Southern blot方法进行比较,结果一致。

分类号： S565.1

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