禽流感病毒H5N2亚型A/Chicken/Gansu/2003株HA+NA基因重组腺病毒的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李宝玉

作者： 李宝玉;殷相平;李学瑞;兰喜;杨斌;方玉萍;柳纪省

作者机构：

关键词： 禽流感病毒;HA+NA基因;重组腺病毒;同源重组

期刊名称： 中国人兽共患病学报

ISSN： 1002-2694

年卷期： 2008 年 24 卷 03 期

页码： 205-209

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的基于腺病毒可感染禽类呼吸道和肠道上皮黏膜的特性,本文构建了包含有禽流感病毒H5N2亚型HA和NA基因的重组腺病毒,为进一步研制口服禽流感活载体疫苗奠定基础。方法通过RT-PCR方法分别扩增出AIV的HA和NA全基因片段,利用拼接接头将HA和NA定向串联并插入到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV之中,然后在大肠杆菌中实现腺病毒骨架载体pAdEasy-1和重组腺病毒穿梭载体的同源重组,获得插有外源基因的重组腺病毒质粒,进而通过转染HEK293细胞,得到含有目的基因HA和NA的重组腺病毒。结果在pAdTrack-CMV载体中成功克隆了HA+NA双基因,并与腺病毒骨架载体在大肠杆菌中实现了同源重组;线性化后的重组腺病毒质粒转染HEK293细胞后可观察到典型的细胞病变和绿色荧光蛋白的表达。结论成功获得了含有HA+NA双基因重的组腺病毒,为口服活载体疫苗的研制提供了依据。

分类号： S852.65

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