紫外线抵抗相关基因UVRAG影响狂犬病病毒感染机制的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 何倩倩

作者： 何倩倩;王鑫鑫;罗杰;温志远;王金良;步志高

作者机构：

关键词： 狂犬病病毒;紫外线抵抗相关基因;胞内运输;代谢型谷氨酸受体2

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 008 期

页码： 812-819

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究宿主因子紫外线抵抗相关基因（UVRAG）影响狂犬病病毒（RABV）感染的机制,本研究在HEK293细胞中干扰或过表达UVRAG后感染表达mCherry蛋白的重组RABV（rERA-mCherry）,于感染后不同时间（24 h、48 h、72 h、96 h）检测上清中病毒的滴度并绘制病毒的生长曲线。结果显示,与转染对照siControl的细胞相比,干扰UVRAG的表达再感染RABV后不同时间细胞上清中的病毒滴度均显著降低（p<0.01）,表明干扰UVRAG的表达后抑制RABV的复制能力;而过表达UVRAG后则不影响RABV的增殖能力。干扰293细胞中UVRAG的表达后分别感染表达RABV G蛋白的重组VSV（rERA-G-VSV）及VSV,6 h后利用q PCR方法检测各细胞中的病毒拷贝数。结果显示,与未干扰的细胞相比,干扰UVRAG表达后细胞中rERA-G-VSV基因拷贝数极显著下降（p<0.001）;但干扰或者未干扰细胞中VSV基因拷贝数则无显著差别。表明RABV G蛋白是rERA-G-VSV在干扰UVRAG表达细胞中增殖下降的原因且UVRAG影响RABV感染的早期侵入阶段。干扰293细胞中UVRAG表达后感染rERAmCherry,利用酸绕过试验进一步分析RABV感染的阶段;上述干扰细胞感染rERA-mCherry后不同时间点（0、1.5 h、6 h）利用qPCR方法检测病毒基因拷贝数,分析UVRAG影响RABV侵入的具体阶段。酸绕过试验结果显示,经pH7.5的PBS处理后,干扰组的细胞相对于未干扰组细胞中RABV基因拷贝数极显著下降（p<0.001）;但pH5.5的酸性PBS处理后两组转染细胞中的病毒拷贝数无显著差异。进一步证明UVRAG在RABV感染早期的侵入阶段发挥重要作用。不同时间点病毒基因拷贝数的qPCR检测结果显示,病毒感染后0、1.5 h两种转染细胞中的病毒拷贝数均无显著差异,但在感染病毒6 h时干扰组的细胞相比于未干扰组的细胞中病毒的拷贝数显著降低（p<0.01）。表明UVRAG影响病毒的胞内运输阶段。利用免疫共沉淀试验（Co-IP）检测UVRAG及其不同结构域蛋白与RABV受体一代谢型谷氨酸受体2（mGluR2）的相互作用关系,结果显示UVRAG的N端aa1～aa147与mGluR2存在特异性的相互作用。以上结果表明,UVRAG影响RABV的胞内运输可能与其和mGluR2的互作相关。本研究初步揭示了UVRAG在RABV感染中的作用,为RABV侵入机制的揭示奠定了基础。

分类号： S855.3

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