非洲猪瘟病毒防污染双重荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 卞志标

作者： 卞志标;郭怡德;席振军;柯海意;蔡汝健;孙铭飞;勾红潮;李春玲

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;荧光定量聚合酶链反应;MGF-505-2R基因

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2023 年 44 卷 001 期

页码： 19-26

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 荧光定量聚合酶链反应(qPCR)技术在非洲猪瘟病毒(ASFV)的检测中发挥重要作用,然而该方法也存在一些局限性.一方面由于检测环境中易产生气溶胶污染,经常导致qPCR检测产生假阳性结果.另一方面,临床上已发现MGF基因缺失的变异株,现有的检测方法将无法满足野毒株与变异株鉴别检测的需求.为了解决qPCR易产生假阳性,ASFV核酸检测靶标基因过分单一的问题,建立了ASFV的防污染双重qPCR检测方法.该检测方法根据C962R基因和MGF-505-2R基因的保守序列设计引物和探针,并在反应体系中加入UNG酶达到防污染的目的,建立了ASFV的防污染双重qPCR检测方法.结果表明,利用该方法对C962R基因和MGF-505-2R的基因标准品进行检测,该检测方法具有较好的鉴别诊断效果.该检测方法的标准曲线具有良好的线性关系,相关系数为0.99;敏感性高,最低检测限为10 copies/μL的ASFV基因标准品;特异性强,与猪丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、副猪嗜血杆菌(Hoemophilus parasuis)、猪链球菌(Streptococcus suis)、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinoba-cillus pleuropneumoniae,APP)及猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)均无交叉反应;重复性较好,变异系数小于1.75%,使用该检测方法对194份临床组织样品检测,与商品化非洲猪瘟病毒抗原检测试剂盒比较,检测结果均为阴性,符合率为100%.该方法预期可用于ASFV野毒株与MGF-505-2R基因缺失株的鉴别诊断,为深入开展分子流行病学调查提供技术储备.

分类号： S852.659.1%S858.28

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