鳜蛙病毒及鳜弹状病毒双重PCR检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 梁红茹

作者： 梁红茹;黄瑜聪;付小哲;林强;刘礼辉;牛银杰;黄志斌;林蠡;李宁求

作者机构：

关键词： 鳜蛙病毒;鳜弹状病毒;双重PCR

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2021 年 003 期

页码： 290-295

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立可以同时检测鳜蛙病毒（SCRIV）和鳜弹状病毒（SCRV）的方法,本研究参考GenBank中登录的SCRIV MCP基因和SCRV N基因序列保守片段分别设计特异性引物,将扩增的MCP基因和N基因分别克隆于pEASY-T1载体,构建重组质粒标准品p-SCRIV和p-SCRV,通过优化退火温度和引物浓度建立了可以同时检测SCRIV（400 bp）和SCRV（280 bp）的双重PCR方法。利用该方法对传染性胰坏死病毒、草鱼呼肠孤病毒、锦鲤疱疹病毒、新加坡石斑鱼虹彩病毒、神经坏死病毒、传染性脾肾坏死病毒、罗非鱼湖病毒及鲤春病毒血症病毒等鱼类常见病毒均无扩增条带,而仅对SCRIV和SCRV有特异性扩增条带,特异性较强;该方法对p-SCRIV的检测下限是1 000拷贝/μL,对p-SCRV检测下限是430拷贝/μL,敏感性较高。对21份临床样品的检测结果表明该双重PCR方法的扩增结果与单一PCR扩增结果一致,二者的符合率为100%。本研究建立的双重PCR检测方法特异性较强,敏感性较高,可以用于上述两种病毒的快速鉴别检测和分子流行病学调查。

分类号： S943

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