H1亚型猪流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达及其间接ELISA方法的初步建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 万春和

作者： 万春和;刘明;刘春国;张晓霁;杨涛;刘大飞;陈浩;齐金龙;乔传玲

作者机构：

关键词： H1亚型猪流感病毒;血凝素基因;昆虫细胞杆状病毒表达;间接ELISA

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2008 年 48 卷 2 期

页码： 220-225

收录情况： CSCD

摘要： 根据GenBank发表的H1亚型猪流感HA基因序列设计引物，扩增出HA基因片段，将其克隆到pFastBacGP67B杆状病毒载体上，筛选阳性重组转座载体pFastBacGP67B-H1，转化含有杆状病毒穿梭载体（bacmid）的DH10Bac感受态细胞，构建杆状病毒表达载体获得重组转座子（rBacmid-H1），在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒（rBV-H1），再感染细胞，收获目的蛋白。通过血凝试验、免疫印迹法、免疫组化分析表明该蛋白得到表达，且具有良好的生物学活性。利用表达的蛋白作为猪流感间接ELISA的抗原，初步建立H1亚型猪流感的间接ELISA检测方法，并对内蒙古、辽宁和黑龙江等地送检的93份猪血清进行了检测，阳性率为31．18％，为研制开发快速、准确、简便的H1亚型猪流感鉴别诊断试剂盒奠定基础。

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