D型流感病毒实时荧光定量PCR方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王旭阳

作者： 王旭阳;卢刚;程娇娇;蔡思棋;钟林涛;赖志颖;贾斌;徐亮;欧嘉俊;肖雨晴;胡学瑞;王芳;赖悯婷;邵冉;郑飞燕;远立国

作者机构：

关键词： D型流感病毒(IDV);实时荧光定量PCR(RT-qPCR);SYBR Green Ⅰ染料;方法;建立;临床检测

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2023 年 018 期

页码： 83-89,137

收录情况： 北大核心

摘要： 为了建立一种可以快捷、灵敏、安全地检测D型流感病毒(Influenza D virus,IDV)的实时荧光定量PCR(quantitative real time PCR,RT-qPCR)方法,试验首先将IDV NP 基因作为检测目标,根据其序列的保守区设计了一对RT-qPCR引物,然后采用单一变量法对RT-qPCR反应条件中的引物浓度和退火温度进行优化,建立了一种可检测IDV的RT-qPCR方法,并对该方法的灵敏度、重复性和特异性进行检测,最后应用该方法进行临床样本检测.结果表明:所建立的RT-qPCR方法的最佳引物浓度和退火温度分别为400 nmol/L和 61℃,标准曲线为y=-3.572x+42.02(R2 =0.999 3);该方法能检测到的最低拷贝数为8.30×101copies,灵敏度是常规PCR的100 倍左右;组内重复和组间重复变异系数(CV)值均小于 3%;同时检测牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛副流感病毒 3 型(BPIV-3)、牛疱疹病毒4 型(BHV-4)和牛流行热病毒(BEFV)的结果均为阴性;应用该方法对收集到的 244 份有呼吸道症状的牛鼻拭子样品进行检测,阳性率为1.23%.说明成功建立了IDV RT-qPCR检测方法,该方法具有灵敏度高、重复性和特异性好的特点,为IDV的防控提供了可靠的技术支撑.

分类号： S855.3

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