多杀性巴氏杆菌Lon蛋白酶的原核表达及ATPase活性的检测

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王淑亚

作者： 王淑亚;郭东春;李影;王雅静;刘家森;姜骞;曲连东

作者机构：

关键词： 多杀性巴氏杆菌;Lon蛋白酶;原核表达;ATPase活性

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2014 年 36 卷 07 期

页码： 530-533

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为表达多杀性巴氏杆菌(P.multocida)Lon蛋白及检测其生物活性,本研究通过PCR扩增P.multocida C51-17株Lon基因,将其克隆到质粒pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET30a-Lon,并将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达重组蛋白Lon,采用Ni-NTA His-Bind Resin纯化目的蛋白。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白Lon分子量大小约为97 ku,主要以可溶性蛋白形式表达;western blot检测结果表明,重组表达蛋白能够被P.multocida阳性血清识别;ATPase活性检测试验表明,纯化的重组蛋白Lon具有ATPase活性,其将ATP降解为ADP的酶活性可以达到27 708.47μmol/(mg·min)。本研究表达了P.multocida Lon重组蛋白,并且测定其ATPase活性,为进一步研究Lon蛋白在P.multocida致病中的作用奠定了基础。

分类号： S852.61

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