芽孢杆菌β-折叠桶植酸酶的原核可溶性表达优化及包涵体复性研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李倩倩

作者： 李倩倩;李中媛;冯舵;黄火清;韩翠晓;杨培龙;姚斌;高伟

作者机构：

关键词： β-折叠桶植酸酶PhyHT;分子伴侣;可溶性表达;包涵体;蛋白纯化

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2012 年 32 卷 08 期

页码： 49-55

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:来源于芽孢杆菌的β-折叠桶植酸酶基因PhyH,截去N端120个碱基编码的40个氨基酸后,成功构建了原核表达体系,通过两种方法分别得到有活性的目的蛋白PhyHT,并通过进一步纯化提高目的蛋白的纯度。方法:通过分子伴侣共表达系统提高目的蛋白的可溶性表达,并通过包涵体复性研究,从包涵体中制备出有活性的目的蛋白。结果:(1)目的蛋白PhyHT主要以包涵体形式存在于沉淀中;(2)通过优化表达条件,降低温度和诱导剂浓度均不能明显改善包涵体问题,通过构建分子伴侣共表达系统(即pG-KJE8、pGro7、pKJE7和pTf16 4种分子伴侣质粒分别与重组表达质粒pET28b-PhyHT共表达),筛选能提高目的蛋白可溶性表达的分子伴侣质粒;(3)包涵体经过复性和进一步的纯化,得到了高纯度的有生物活性的目的蛋白。

分类号： Q78

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