猪流行性腹泻病毒N基因的原核表达与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘华南

作者： 刘华南;曹伟军;杨帆;张艳;杨华;王松豪;郑海学

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻病毒;N基因;原核表达;纯化;鉴定

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2013 年 11 期

页码： 1152-1156

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了克隆和表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的N基因,根据GenBank中登录的PEDV(CV777株)的N基因序列设计1对特异引物,提取阳性临床样品的总RNA,通过RT-PCR方法获得PEDV的N基因。将N基因定向克隆至表达载体pET-28a-His-Sumo中,酶切和测序鉴定表明获得了阳性重组表达质粒pET-28a-His-Sumo-N。将阳性质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,并进行IPTG诱导表达,用SDSPAGE和Western-blot对表达的目的蛋白进行分析。SDS-PAGE检测结果表明获得了60.0ku的表达产物,与目的蛋白大小符合;Western-blot结果显示,纯化后的目的蛋白能与PEDV阳性血清发生特异反应。表明成功对PEDV-N蛋白进行了原核表达,且纯化后的蛋白质具有良好的反应原性。

分类号： S852.65

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