鹅坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅲ的原核表达及抗原性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黄欣梅

作者： 黄欣梅;赵冬敏;刘宇卓;杨婧;韩凯凯;李银

作者机构：

关键词： 鹅坦布苏病毒;E蛋白;结构域Ⅲ;原核表达;免疫原性

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2015 年 46 卷 01 期

页码： 150-154

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】获得鹅坦布苏病毒(GTMUV)E蛋白结构域III的原核表达重组蛋白并明确其免疫原性,为进一步研究其生物学功能及研制亚单位疫苗奠定基础。【方法】根据Gen Bank中GTMUV JS804株E蛋白结构域III的同源基因序列设计1对引物,在其两端加入Flag标签序列和酶切位点,采用PCR扩增GTMUV的E蛋白结构域III基因(EIII),然后与p ET32a原核表达载体连接构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后用IPTG诱导融合蛋白表达,并以Western blotting鉴定其免疫原性。【结果】PCR扩增获得携带Flag标签序列的EIII基因片段约430 bp,将其插入p ET32a载体可成功构建重组质粒p ET32a-EIII。阳性重组菌经IPTG诱导表达5 h即可得到融合蛋白,分子质量约33.0 k Da,主要以包涵体形式存在。Western blotting鉴定结果显示,融合蛋白与抗Flag标签单克隆抗体、小鼠抗坦布苏病毒多克隆抗体均可发生特异性反应,检测到预期的目的条带。【结论】GTMUV E蛋白结构域Ⅲ能在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白具有良好的免疫原性,可用于研制GTMUV诊断抗原和亚单位疫苗。

分类号： S852.65

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