利用实时荧光定量PCR方法分析转基因水稻外源基因拷贝数

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨立桃

作者： 杨立桃;赵志辉;丁嘉羽;张承妹;贾军伟;张大兵

作者机构：

关键词： 植物,转基因;稻(米);聚合酶链反应;基因剂量

期刊名称： 中国食品卫生杂志

ISSN： 1004-8456

年卷期： 2005 年 17 卷 02 期

页码： 140-144

摘要： 为分析转基因水稻外源基因拷贝数 ,利用新型、灵敏、高通量的实时荧光定量PCR方法进行转基因水稻外源基因拷贝数的分析。转基因外源基因的拷贝数通过转基因水稻外源基因 (GUS和HPT基因 )和水稻内标准SPS基因含量的比较计算获得。定量分析了 14株T0 代的转基因水稻植株 ,得到了外源基因插入分别为 1、2、3和 4的转基因植株 ,同时利用SouthernBlot方法进行验证分析。随机选择 18个已经过定量PCR检测分析的转基因水稻植株 ,用SouthernBlot的方法分析转基因水稻植株中的HPT或GUS基因的拷贝数 ,SouthernBlot分析结果显示有 15个转基因水稻植株的分析结果与定量PCR分析的结果是一致的 ,3个植株定量PCR分析的转基因拷贝数稍高于SouthernBlot的分析结果 ,主要原因是SouthernBlot方法在同一个插入位点有多拷贝的T -DNA片段插入时 ,转基因植株的基因组在完全酶切时会产生相似的DNA片段 ,电泳分析时很难分辨清楚。定量PCR方法则完全避免了这种情况的发生 ,除非目的基因DNA片段在PCR引物处发生断裂。两种方法分析结果的比较显示定量PCR方法分析转基因拷贝数更加有效、适用。

分类号： S511

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