牛冠状病毒S1蛋白的真核表达及间接ELISA方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黄金

作者： 黄金;李思远;毛立;蔡旭航;谢玲玲;王府;周华;李基棕;李彬

作者机构：

关键词： 牛冠状病毒;昆虫杆状病毒表达系统;S1蛋白;间接ELISA

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2024 年 005 期

页码： 2050-2060

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种检测牛冠状病毒（BCoV）的抗体间接ELISA检测方法，本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白，并作为包被抗原，建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法，应用于临床样品检测。结果显示，S1蛋白大小约100 ku,可表达于昆虫High5细胞培养基上清，经Western blot鉴定S1蛋白抗原性良好；经反应条件优化，确定抗原包被浓度为0.125μg·mL-1,血清稀释度为1∶200;采用1%明胶，于37℃封闭3 h;血清样品于37℃孵育30 min;酶标二抗的稀释度1∶25 000,37℃孵育45 min; 37℃避光显色13 min;临界值为0.297;经检验，该方法特异性良好；批间及批内变异系数均小于10%。当临界值为OD450 nm为0.297时，若以IFA为标准，ELISA的敏感性为96.88%（31/32）,特异性为87.50%（7/8）,与IFA具有很强的一致性（κ=0.844,P＜0.01）;若以中和试验为标准，ELISA的敏感性为100.00%（31/31）,特异性为88.89%（8/9）,与血清中和试验具有很强的一致性（κ=0.925,P＜0.01）。采用该方法对303份牛血清进行检测，BCoV阳性率为74.91%。由此说明，本研究建立的ELISA方法特异性强，敏感性高，重复性好，可用于BCoV的血清学调查和临床诊断，并可以应用于替代中和试验检测BCoV免疫后抗体水平。

分类号： S852.653

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