小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株F基因的克隆与原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨帆

作者： 杨帆;窦永喜;朱学亮;骆学农;岳城

作者机构：

关键词： 小反刍兽疫病毒;F蛋白;克隆;原核表达

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2009 年 39 卷 06 期

页码： 503-509

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 提取小反刍兽疫病毒(PPRV)疫苗株Nigeria 75/1的总RNA,用RT-PCR方法扩增F基因并克隆到pMD18-T载体中,以鉴定正确的质粒为模板克隆去掉N端信号肽和跨膜区的F基因(F-1)并亚克隆于原核表达载体pET-30a(+),得到重组质粒pET30-F-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析,同时将重组蛋白免疫SPF家兔制备抗体,进行间接免疫荧光检测并用ELISA测定抗体效价。结果显示,目的基因正确插入了表达载体,在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,用重组蛋白免疫3次后,兔血清抗体达到较高水平,Western-blot分析说明表达产物能够与兔血清抗体发生特异性反应,间接免疫荧光试验显示重组蛋白免疫兔阳性血清能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原。表明,重组蛋白在原核表达系统内得到了高水平的表达,并且具有较好的反应原性。

分类号： S852.659.5

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