甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 汪涵

作者： 汪涵;吴伟怀;杨旭光;杨先锋;李锐;郑金龙;黄兴;梁艳琼;贺春萍;易克贤

作者机构：

关键词： 甘蔗褐锈病;黑顶柄锈菌;巢式PCR分子检测

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2017 年 12 期

页码： 2334-2339

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法,本研究利用真菌DNA内源转录间隔区通用引物ITS1/ITS4扩增甘蔗黑顶柄锈菌DNA,并对其扩增产物进行克隆测序,获得序列于NCBI网站进行比对分析,并于该序列多态性丰富区域设计了2对引物PM2F/R、PM3F/R。通过对同寄主不同病原菌、以及不同属的锈菌DNA进行PCR检测以验证引物的特异性。结果表明,在优化的单一PCR反应体系与程序条件下,2对引物均仅能从甘蔗黑顶柄锈菌中扩增出约474 bp和363 bp的特异条带,而从其它真菌DNA中均扩增不出任何条带。进一步将引物PM2F/R作为第一轮扩增引物、PM3F/R作为第二轮扩增引物进行巢式PCR扩增后,其检测灵敏度在DNA水平上可达0.001 ng/μL,较常规PCR提高100倍。由此表明,依据本研究所设计的2对引物而建立的快速、灵敏、准确的甘蔗黑顶柄锈菌的检测技术,对病原菌的早期诊断、快速检测及病害流行学研究具有重要意义。

分类号： S435.661

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