牛源无乳链球菌sip蛋白抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郎景民

作者： 郎景民;布日额;孙立杰;刘娣;吴金花;锡林高娃;刘燕;史芬芳

作者机构：

关键词： 无乳链球菌;sip基因;原核表达;间接ELISA

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2011 年 33 卷 01 期

页码： 37-40

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为测定牛源无乳链球菌表面免疫相关蛋白(sip)的抗原性,本实验通过建立间接ELISA方法,对该蛋白的抗原性进行分析及鉴定。根据无乳链球菌sip基因序列,设计一对引物,以临床分离菌株基因组DNA为模板,PCR扩增sip抗原表位优势区编码的基因序列,并将其与原核表达载体pET-30a(+)连接,构建重组质粒pET-sip,转化宿主菌BL21中,经IPTG诱导,获得重组蛋白,western blot分析表明,重组蛋白具有良好的抗原性。以纯化的表达产物作为包被抗原,建立检测无乳链球菌抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为3.125μg/mL,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1∶4 000。应用该方法对无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌兔阳性血清进行检测,结果表明,该方法具有良好的特异性和灵敏度。

分类号： S858.23

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