基于ORF3蛋白抗体的鹅圆环病毒间接ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 付环茹

作者： 付环茹;赵敏;江锦秀;陈翠腾;张靖鹏;李兆龙;万春和

作者机构：

关键词： 鹅圆环病毒(GoCV);ORF3蛋白;原核表达;间接ELISA;流行病调查

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2024 年 32 卷 003 期

页码： 730-738

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 鹅圆环病毒(Goose circovirus,GoCV)是一种潜在的免疫抑制病原,主要感染宿主淋巴细胞,导致免疫功能下降,易造成其他病原继发感染,给养鹅(Anser cygnoides orientalis)业带来极大危害.为建立鹅圆环病毒血清学抗体的间接ELISA方法,本研究将GoCV的ORF3基因插入到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-ORF3,经表达条件优化,以Ni柱亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析表明,获得的重组ORF3蛋白具有良好的生物学活性.以纯化后的重组ORF3蛋白作为包被抗原,通过优化各反应条件建立了GoCV间接ELISA抗体检测方法.优化后的间接ELISA检测条件为:重组ORF3蛋白的最佳包被浓度为2.00 μg/mL、待检血清稀释度为1∶80、酶标二抗最佳稀释度分别为1∶4000(羊抗鸡HRP-IgG)和1∶8000(羊抗鸭HRP-IgG).采用建立的间接ELISA方法对鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)、鹅源禽坦布苏病毒(Avian tembusu virus,ATmV)、鹅源H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype avian influenza virus,AIV)、鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus,GRV)、新型鹅星状病毒(Goose astrovirus,GoAstV)、GoCV等鹅源阳性血清进行检测,结果显示,仅GoCV阳性血清为阳性结果,其他病原阳性血清检测结果均为阴性,特异性较强;重复性较好,批内和批间变异系数均小于5%.流行病学调查结果显示,福建和广东地区鸭(Anatinae)群中均存在GoCV跨种感染.本研究建立的检测GoCV血清抗体的间接ELISA方法特异性强、重复性好,可用于GoCV感染的诊断及流行病学调查研究.

分类号： S855.3

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