利用Tol2转座子构建转基因草金鱼初探

文献类型: 中文期刊

第一作者: 董颖

作者: 董颖;胡红霞;王巍;田照辉

作者机构:

关键词: Tol2转座子;转基因;草金鱼

期刊名称: 生物技术通报

ISSN: 1002-5464

年卷期: 2014 年 22 卷 05 期

页码: 122-128

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 青鳉Tol2转座子是脊椎动物中发现的第一例天然具有活性的转座子,目前已经被成功应用于多种模式动物的转基因研究中。采用PCR的方法以质粒pCAgcGH为模板亚克隆出一段含有草鱼生长激素(GH)5个外显子、鲤鱼β-actin启动子及多个酶切位点的序列,并将这段序列与经双酶切处理的质粒pTol2-MCS-EGFP进行重组连接,得到重组质粒pTol2-GH-EGFP。采用显微注射的方法将重组质粒pTol2-GH-EGFP与体外合成的Tol2转座酶mRNA一起注入草金鱼受精卵中。通过观察绿色荧光和PCR检验绿色荧光蛋白和GH基因的表达,筛选出成功转入外源基因的草金鱼。阳性表达检出率为17.3%。利用Tol2转座子构建转基因草金鱼,不仅丰富了Tol2转座子的应用范围,而且为进一步利用Tol2转座元件进行观赏鱼转基因及基因表达研究奠定了基础。

分类号: Q78

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