口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC基因的克隆及3AB基因的原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 曹轶梅

作者： 曹轶梅;刘在新;卢曾军;胡永浩;常惠芸;谢庆阁

作者机构：

关键词： 口蹄疫病毒;3ABC基因;3AB基因;克隆;表达

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2004 年 24 卷 01 期

页码： 31-34

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从感染口蹄疫病毒 (foot- and- m outh disease virus,FMDV)的细胞中提取总 RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT- PCR)获得了长度约为 14 0 0 bp的核酸片段 ,与预期长度相符。扩增产物经克隆后 ,测序证明其含有完整的 3ABC基因。该序列与国外参考序列 0 1K/ 6 6相比 ,同源性在 99%以上。亚克隆 3ABC基因至表达载体 p Tri Ex- 4 Neo中 ,通过序列分析发现 ,克隆到 p Tri Ex- 4 Neo载体上的片段于 3ABC基因 70 9～ 72 5 bp之间有 17bp的缺失 ,碰巧在 3AB基因后形成一终止密码子 ,但 3AB基因的阅读框架完整。选出含有 3AB基因完整阅读框架的阳性克隆 ,用 IPTG诱导表达 ,收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western blotting分析 ,结果表明 ,3AB基因在大肠杆菌中成功表达 ,其表达产物为分子质量 33.5 ku的融合蛋白 ,并能被口蹄疫病毒阳性血清识别。经薄层扫描分析 ,表达的目的蛋白占总蛋白量的 2 6 %以上。该项研究为应用重组 FMDV非结构蛋白为抗原建立感染和免疫的鉴别诊断方法提供了依据

分类号： S852.65

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