抗黄矮病小麦－中间偃麦草易位系基因组可转化人工染色体文库的构建与初步筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王晓萍

作者： 王晓萍;张增艳;张群宇;刘耀光;辛志勇

作者机构：

关键词： 抗黄矮病小麦;中间偃麦草;易位系;基因组;筛选;黄矮病抗性;可转化人工染色体;文库;SCAR

期刊名称： 遗传学报

ISSN： 0379-4172

年卷期： 2002 年 29 卷 8 期

页码： 712-718

收录情况： CSCD

摘要： 利用抗黄矮病小麦－中间偃麦草易位系HW642的细胞核DNA构建了一个可转化人工染色体（transformation-competent artificial chromosome,TAC)文库，文库由2．3×10^6，克隆构成，重组率为90．48％，平均插入片段大小为22kb左右，约覆盖普通小麦单倍体基因组2．5倍，在该文库中分离得到单拷贝DNA序列的几率约是95．77％，文库保存24块96孔板中，每个孔中约含有1000个不同的重组克隆，可以采用Pooled PCR的方法对文库进行筛选，用来源于小麦的简单重复序列（simple sequence repeat,SSR)引物wms37扩增中间偃麦草，抗病易位及感病材料，得到一条与抗性共分离的特异条带，约450bp,将此特异标记条带转化为SCAR（sequence characterized amplified region)，标记，用于筛选HW642基因组TAC文库，得到12个阳性克隆， 对阳性克隆进行了PCR－Southern验证，以中间偃麦草基因组部DNA为探针与限制酶Hind Ⅲ消化后的阳性克隆杂交，其中10个阳性克隆分别有1－6条杂交带，结果表明，这10个阳性克隆可作为抗黄矮病相关基因筛选的候选克隆。

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