牛分枝杆菌融合基因hsp65-esat6的原核表达及产物的纯化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 迟磊

作者： 迟磊;刘思国;宫强;王春来;赵昆;王勇;刘建东;刘慧芳;周媛媛;常月红;云孟克;赵福广

作者机构：

关键词： 牛分枝杆菌;融合基因;原核表达;纯化

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2007 年 37 卷 03 期

页码： 223-226

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板扩增hsp65和esat6基因,采用重叠延伸剪接技术(SOE)获得了融合基因hsp65-esat6,将hsp65-esat6连接到原核表达载体pET32a(+)上,构建重组质粒pET65-E6,将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,以IPTG诱导(终浓度为1 mmol/L),表达产物进行SDS-PAGE分析。以Ni2+亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Western-blot分析该融合蛋白的免疫活性。结果表明:Hsp65-ESAT6融合蛋白以包涵体形式表达。表达的融合蛋白裂解为两部分,即58 ku和30ku,二者相加与预测大小88 ku相符。纯化的融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生反应。

分类号： S852.61

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