用反向斑点杂交方法检测猪常见致病菌

文献类型： 中文期刊

第一作者： 曹峰子

作者： 曹峰子;伍诚意;宋勤叶;江洪;梁之昶;季海峰;陈小玲

作者机构：

关键词： 反向斑点杂交;rRNA基因;猪致病基因;反向PCR

期刊名称： 生物技术通讯

ISSN： 1009-0002

年卷期： 2010 年 21 卷 03 期

页码： 401-405

摘要： 目的:建立检测猪常见致病菌的反向斑点杂交方法。方法:将23S rRNA基因芯片用的针对12种细菌的25～30 mer探针加长到30～38 mer,2对通用引物序列不变。用地高辛标记下游引物,以尼龙膜为载体制备膜芯片,检验探针/膜杂交的特异性和敏感性;另外设计1条大肠杆菌K88基因探针、一段带K88探针的报告基因和1对报告基因的反向PCR引物,在PCR体系中增加封口的K88报告基因和反向引物对,被检样品扩增后进行膜杂交。结果:修改的13条探针与参考目标菌株在膜上成特异性杂交,对52个参考菌株和野外分离株的检测准确率为92%;膜杂交的敏感性与玻片芯片接近,最小检出量为100 fg DNA;在尼龙膜上增加K88探针,与3重PCR产物杂交,可以检测到大肠杆菌K88毒力基因。结论:建立的反向斑点杂交方法简便快速,检测成本低,可用于仪器设备不足的实验室,同时可以加入检测如大肠杆菌K88等致病基因,提高基于保守基因的芯片的诊断能力。

分类号： S858.28

  • 相关文献

[1]H5和H9亚型禽流感病毒反向斑点杂交同步检测法的建立. 王伟,薛强,邹明强,柴同杰,田甜. 2010

[2]植物rRNA基因组织模式的荧光原位杂交比较分析. 蒋向辉,宋运淳. 2012

[3]向日葵rRNA基因克隆及其染色体定位研究. 高猛,安玉麟,孙瑞芬,张艳芳. 2014

[4]簇毛麦和中间偃麦草rRNA基因位点双色荧光原位杂交分析. 裴自友,袁文业,孙善澄,孙玉,富田因则,安室喜正. 2002

[5]蜜蜂及熊蜂微孢子虫rRNA基因研究. 陈文锋,吴杰,李继莲,安建东,黄家兴. 2009

[6]香蕉穿孔线虫28S rRNA基因的D2／D3区序列分析. 彭德良,黄文坤. 2008

[7]蜜蜂及熊蜂微孢子虫核糖体RNA(rRNA)基因研究概况. 陈文锋,吴杰,李继莲,安建东,黄家兴. 2008

[8]宁夏地区奶牛源隐孢子虫分子鉴定与分析. 黎玉琼,于有利,从志鹏,赵正伟,梁小军,王韦健,李继东,李勤凡,文亮,牛晓昊. 2024

[9]两种蛤仔线粒体16SrRNA基因和CO I基因的序列比较. 刘相全,包振民,方建光,王如才. 2011

[10]基因芯片在植物病害诊断的应用展望. 颜冬冬,郭美霞,王秋霞,李园,曹坳程. 2011

[11]青枯雷尔氏菌Tn5转座子无致病力突变株构建及其生物学特性. 程本亮,车建美,刘波. 2011

[12]军曹鱼淋巴囊肿病毒主衣壳蛋白基因全序列分析. 付小哲,石存斌,李宁求,潘厚军,常藕琴,吴淑勤. 2007

[13]基因侧翼序列扩增技术的应用进展. 蒲远波,郭翠,平淑珍. 2016

[14]猪精氨酸-丝氨酸蛋白激酶1(SRPK1)克隆表达及功能初步分析. 俄广鑫,刘娣,张冬杰,杨秀琴,崔羽,祝继原,杨少成,王嘉博,谢宇彤. 2010

[15]反向PCR克隆转基因水稻的外源基因旁侧序列. 韩志勇,王新其,沈革志. 2001

[16]三角叶滨藜甜菜碱醛脱氢酶基因5′侧翼序列的克隆与分析. 何晓兰,刘桂华,倪万潮,侯喜林,吴纪中,钦佩,朱卫民. 2004

[17]优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究(英文). 杨坤,吴学龙,朗春秀,陈锦清. 2010

[18]反向PCR法扩增花粉特异表达基因PSG076启动子. 陈泠,苏佩佩,佟汉文,刘易科,朱展望,杨广笑,高春保,何光源. 2012

[19]染色体步移技术研究进展. 梁成真,张锐,郭三堆. 2009

[20]反向PCR鉴定piggyBac介导的哺乳动物细胞转基因研究. 郝碧芳,王猛. 2011

作者其他论文 更多>>

微信小程序