Myostatin基因打靶载体的构建及猪胎儿成纤维细胞Myostatin基因的敲除

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李鸿辉

作者： 李鸿辉;冯冲;王宁;闫军;哈福;陈红星;樊宝良;潘登科

作者机构：

关键词： Myostatin基因;缺口修复;基因打靶;正负筛选;大白猪

期刊名称： 生物技术通讯

ISSN： 1009-0002

年卷期： 2010 年 21 卷 05 期

页码： 699-704

摘要： 目的:用缺口修复等技术构建Myostatin(肌肉生长抑制素,MSTN)基因打靶载体,并对大白猪胎儿成纤维体细胞进行转染,获得基因敲除细胞。方法与结果:首先构建用于MSTN基因同源长臂(LA)的抓捕载体,然后在大肠杆菌内利用Red同源重组系统介导的缺口修复,从含大白猪MSTN基因座的细菌人工染色体上亚克隆9.9 kb的LA到抓捕载体上,经过部分序列测定,同源性为100%;通过PCR获得1.4 kb的同源短臂(SA);将LA和SA连入载体pLOXP,构建含有neo和tk正负筛选标记基因的MSTN基因打靶载体pLOXP-MSTN-KO;将线性化的pLOXP-MSTN-KO通过电转染整合到大白猪胎儿成纤维细胞基因组中,利用G418和丙氧鸟苷进行药物筛选,获得抗性细胞克隆890个,通过PCR和DNA测序鉴定获得基因敲除的细胞克隆4个。结论:构建了有效的MSTN基因打靶载体,通过转染获得基因敲除细胞,为利用体细胞核移植制备MSTN基因敲除猪奠定了基础。

分类号： Q78

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