坏死梭杆菌白细胞毒素基因SH片段的克隆与表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵利芳

作者： 赵利芳;陈立志;张秀华;冯书章;王克坚;刘晓颖;陆伟;冯凯;王秀东;姚志利

作者机构：

关键词： 坏死梭杆菌;SH;克隆;表达

期刊名称： 特产研究

ISSN： 1001-4721

年卷期： 2009 年 31 卷 01 期

页码： 14-18

摘要： 坏死梭杆菌白细胞毒素是坏死杆菌病的主要致病因子,白细胞毒素基因(lkt)是其编码基因。以分离到的国内牛源坏死梭杆菌FN(A)菌株F4基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增白细胞毒素基因SH片段,克隆至pMD18-T载体上,以BamHⅠ和HindⅢ酶切的目的片段SH与相应酶切的pET32a载体连接构建pET32a-SH重组表达质粒,经转化E coli BL21(DE3)后用IPTG进行蛋白诱导,SDS-PAGE检测重组蛋白表达情况。结果表明:扩增基因序列大小为1800bp,SDS-PAGE检测重组蛋白有效表达,表达得到大小为80.2kDa的目的蛋白,采用镍柱亲和层析方法纯化SH重组蛋白,获得了纯度达95%的重组蛋白;经West-ern-blot证实,该蛋白对抗坏死杆菌阳性血清具有反应活性。

分类号： S855.12

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