小鼠腹腔巨噬细胞的分离培养及Ipr1基因真核表达载体的构建和表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈元圆

作者： 陈元圆;马勋;薄新文;王新华;黄新

作者机构：

关键词： Ipr1基因;结核病;转染;巨噬细胞;真核表达载体

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2014 年 11 期

页码： 21-24+229

收录情况： 北大核心

摘要： 为了获取Ipr1基因全长编码序列,构建与EGFP基因融合的表达载体,观察小鼠Ipr1基因在小鼠巨噬细胞中的表达情况及对细胞生长状态的影响,试验通过RT-PCR方法获得Ipr1基因,将获得的Iprl基因片段与pEGFP-C1载体片段连接后获得真核表达质粒pEGFP-Ipr1,经PCR、酶切鉴定正确后,脂质体瞬时转染pEGFP-Ipr1至第5代的小鼠腹腔巨噬细胞内,以空质粒pEGFP-C1转染组作为对照,采用Western-blot检测Ipr1基因的表达并用荧光显微镜观察融合蛋白的表达情况。结果表明:研究构建了真核表达载体pEGFP-Ipr1并进行了Ipr1基因转染,通过Western-blot检测在大约50 ku处有目的条带,转染24 h后有绿色荧光蛋白表达,并经G418筛选获得稳定转染Ipr1基因的小鼠腹腔巨噬细胞株。说明试验获得了易于转染的小鼠腹腔巨噬细胞株,成功转染了Ipr1基因并得以表达。

分类号： Q78

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