山羊干扰素刺激基因15克隆、生物信息学分析及亚细胞定位

文献类型： 中文期刊

第一作者： 唐井玉

作者： 唐井玉;杜汉宇;孟春春;刘光清

作者机构：

关键词： 山羊;ISG15基因;克隆;表达;生物信息学分析;亚细胞定位

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2022 年 49 卷 008 期

页码： 2843-2854

收录情况： 北大核心

摘要： [目的]对山羊干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)的CDS区进行克隆、表达和生物信息学分析,并探讨小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)感染山羊子宫内膜上皮细胞(caprine endometrial epithelial cells,EEC)对ISG15的影响.[方法]根据GenBank中公布的山羊ISG15基因预测序列(登录号:XM_005690795)设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增山羊ISG15基因CDS区,连接至真核表达载体进行测序并表达,对不同物种ISG15核苷酸及氨基酸序列进行比对,并构建系统进化树,利用生物信息学方法对ISG15蛋白理化性质、跨膜结构、修饰位点、二级结构、三级结构、亚细胞定位等进行分析.通过构建真核表达载体转染及PPRV感染EEC细胞,利用间接免疫荧光的方法观察其外源性和内源性亚细胞定位,并探究PPRV感染对EEC细胞的影响.[结果]成功克隆出山羊ISG15基因CDS区并进行了真核表达.山羊ISG15核苷酸和氨基酸相似性及进化树分析都与盘羊和绵羊亲缘关系最近.生物信息学分析结果显示,山羊ISG15基因位于16号染色体上,全长474 bp,编码157个氨基酸,分子质量约为17.47 ku,为亲水性蛋白,无跨膜区和信号肽,有1个潜在的N-糖基化位点,16个潜在的O-糖基化位点和10个潜在的磷酸化位点.二级结构与三级结构预测显示,山羊ISG15蛋白由无规则卷曲、延伸链、α-螺旋和β-转角组成,比例分别为34.39%、31.21%、21.66%和12.74%.可以与干扰素和泛素化相关的蛋白相互作用,并参与机体的抗感染作用.亚细胞定位显示,外源性和内源性ISG15均定位于细胞质中.[结论]试验成功克隆出山羊ISG15基因CDS区序列,亚细胞定位发现内源性和外源性ISG15均定位于EEC细胞的细胞质中.结果为后续ISG15基因细胞内功能研究奠定基础.

分类号： S827

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