猪脑心肌炎病毒SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 施开创

作者： 施开创;陈进喜;屈素洁;许瑞胜;熊毅;刘棋;陈汉忠;李刚

作者机构：

关键词： 脑心肌炎病毒;猪;荧光定量PCR;SYBR Green I

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2009 年 39 卷 2 期

页码： 135-139

收录情况： CSCD

摘要： 针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因序列设计并合成了1对引物,以构建的含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法.检测结果显示,该方法线性关系好,标准曲线的相关系数达到0.991;对初始模板的检出下限为1×10~1copies/μL,比常规PCR方法高100倍;与其他猪源病毒,如口蹄疫病毒(FMDV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)均不发生交叉反应;组内与组间的变异系数均小于3%.应用建立的方法检测了17份临床可疑病例的心、脑组织样本,结果1份为阳性.表明,建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于EMCV的病原检测及定量分析.

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