应用抑制性差减杂交技术构建副猪嗜血杆菌基因组差减文库

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李淼

作者： 李淼;李春玲;宋帅;杨冬霞

作者机构：

关键词： 副猪嗜血杆菌;抑制性差减杂交;差异基因文库

期刊名称： 广东农业科学

ISSN： 1004-874X

年卷期： 2011 年 38 卷 13 期

页码： 128-130

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)有毒力菌株SW124(血清4型)和无毒力菌株H465(血清11型)间的差异表达基因文库,采用抑制性差减杂交技术(Suppression subtractive hybridization,SSH)分析SW124和H465菌株细菌基因组的表达差异,并进行两轮差减杂交和两次PCR扩增,将第2次PCR产物与pMD19-T载体相连,转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞并进行文库扩增和蓝白斑筛选,RT-PCR鉴定差异表达文库。结果共获得327个阳性克隆,筛选100个克隆制备质粒进行PCR检测,均扩增出100～2 000 bp大小的片段。差异DNA差减文库的构建为进一步筛选、克隆HPS特异的未知新基因、建立分子鉴别新体系奠定了基础。

分类号： R346

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