非洲猪瘟病毒微滴式数字PCR检测方法的建立与优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王永浩

作者： 王永浩;刘鹏翔;宋帅;陈玉婷;温肖会;向国庆;陈美霞;李文超;罗胜军

作者机构：

关键词： 微滴式数字PCR(ddPCR);非洲猪瘟;定量检测;拷贝数

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2025 年 41 卷 030 期

页码： 156-164

收录情况： CSCD

摘要： 本研究旨在建立一种检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法.通过合成ASFV特异性引物和探针,优化退火温度、引物和探针浓度等反应条件,对方法的特异性、灵敏度和重复性进行综合评价,并根据优化后的条件进行初步临床应用.结果显示:建立的ddPCR方法最佳退火温度为61.4℃;最佳引物和探针终浓度分别为700 nmol/L和150 nmol/L;特异性试验显示该方法仅特异性扩增ASFV,与其他常见疫病病毒无交叉反应;最低检测限为1.37 copies/μL,比荧光定量PCR敏感性高10倍,浓度梯度线性分析显示良好线性关系(R2=0.9898);重复性试验中变异系数均低于10%.利用该方法检测80份不同来源的疑似ASFV临床样本,结果显示均为阴性,与荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法检测结果一致.综上,本研究建立的ddPCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,可用于ASFV临床样本的精确检测分析.

分类号： S855.3

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