鸭坦布苏病毒甲基转移酶的真核表达及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 韩凯凯

作者： 韩凯凯;严若峰;刘青涛;刘宇卓;李银;赵冬敏;黄欣梅;杨婧

作者机构：

关键词： 鸭坦布苏病毒;甲基转移酶;真核表达

期刊名称： 江苏农业科学

ISSN：

年卷期： 2021 年 015 期

页码： 147-150

收录情况： 北大核心

摘要： 甲基转移酶（methyltransferase, MTase）是鸭坦布苏病毒（duck Tembusu virus, DTMUV）非结构蛋白5的重要功能基团,在病毒复制及致病过程中发挥重要作用。为了对鸭坦布苏病毒甲基转移酶进行真核表达,并对其生物学功能进行鉴定,以GenBank中收录的DTMUV JS804株基因序列为模板,设计针对MTase的特异性引物,提取TMUV RNA,反转录得到cDNA,以其为模板进行扩增,得到MTase的基因片段,然后亚克隆至pCMV-Flag真核表达载体中,构建重组质粒pCMV-Flag-MTase,提取去除内毒素的重组质粒,并转染至BHK-21细胞,通过间接免疫荧光观察和Western Blot鉴定该蛋白的表达。结果显示,质粒pCMV-Flag-MTase经双酶切鉴定证明构建正确,通过间接免疫荧光与Western Blot检测,重组质粒在BHK-21细胞内正常表达,表达的蛋白与天然坦布苏病毒MTase具有相同的反应原性。

分类号： S852.65

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