表达禽网状内皮组织增生病病毒gp90蛋白的重组马立克氏病病毒的构建及生物学特性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 许曾焜

作者： 许曾焜;李凯;刘永振;高立;刘长军;张艳萍;高玉龙;祁小乐;崔红玉;王笑梅

作者机构：

关键词： 禽网状内皮组织增生病;gp90蛋白;马立克氏病病毒;重组病毒

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2020 年 009 期

页码： 867-871

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 禽网状内皮组织增生病(RE)是禽类一种重要免疫抑制性疾病,目前尚无有效的商品化疫苗预防该病.为研制表达RE病毒(REV)gp90蛋白的重组鸡马立克氏病病毒(MDV),本研究构建了含有REV保护性抗原基因gp90的pCAGGS-gp90表达质粒,将gp90表达框架克隆入pENTR1载体,获得重组质粒pENTR1-gp90.通过pENTR1-gp90与p814-5US2KanccdB重组粘粒的LR反应,将gp90表达框架插入p814-5粘粒中MDV 814疫苗株基因组US2基因内,构建重组粘粒p814-5-gp90.将该重组粘粒转染鸡胚成纤维细胞(CEF),获得重组MDV r814-gp90株.将该重组病毒在CEF中连续传至20代后对第5、10、15、20代病毒经PCR扩增并测序鉴定;利用间接免疫荧光试验(IFA)和western blot检测重组MDV感染细胞中gp90蛋白的表达;绘制重组MDV的生长曲线,分析其体外复制特性.结果显示,正确构建了含有gp90表达框架的重组粘粒p814-5-gp90.将该重组粘粒转染CEF后能够引起典型的蚀斑病变,且蚀斑形态大小与亲本病毒814株无明显差异.PCR及测序鉴定结果显示,重组病毒r814-gp90基因组中正确插入gp90基因表达框架,且其能够在该重组病毒中稳定存在.IFA及western blot检测结果表明,r814-gp90株能够在感染的CEF中表达gp90蛋白.体外生长曲线显示,r814-gp90株在CEF中的复制能力与亲本病毒无明显差异.以上结果表明,本研究正确构建了表达REV保护性抗原gp90基因的重组MDV,为研制RE重组MDV活载体疫苗奠定了基础,对RE以及REV与MDV混合感染的防控具有重要意义.

分类号： S852.65

  • 相关文献

[1]表达禽网状内皮组织增生病病毒ggpp90蛋白的毕赤酵母基因工程菌发酵工艺优化研究. 李凯,刘鹤,赵宪成,高宏雷,王笑梅. 2015

[2]禽网状内皮组织增生病流行现状及防控. 邓小芸,祁小乐,李凯,胡峰,高玉龙,高宏雷,王笑梅. 2015

[3]禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF鸡免疫器官和疫苗免疫效果的影响. 李凯,高立,祁小乐,高宏雷,高玉龙,王永强,王笑梅. 2016

[4]禽网状内皮组织增生病病毒gp90全长蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性分析. 高立,祁小乐,高宏雷,高玉龙,秦立廷,孙芬芬,张云,王笑梅. 2009

[5]马立克氏病病毒河南分离株Meq基因的克隆与序列分析. 余祖华,滕蔓,丁轲,闵亚杰,禹乐乐,宿靖伟,程相朝,罗俊. 2014

[6]山东省白羽肉鸡中MDV、REV、CAV和ARV感染状况的病原学调查. 孟斌,胡北侠,许晓云,路希山,张金强,李建亮,张秀美,崔言顺. 2010

[7]鸡马立克氏病病毒流行毒株高代次细胞毒株Meq、RLORF4、RLORF12及132bpr基因变异分析. 刘爱玲,刘长军,张艳萍,李晶梅,施维松. 2009

[8]河南鸡群马立克氏病病毒流行毒株的分子进化分析. 宿靖伟,罗俊,王新卫,迟佳琦,禹乐乐,党露,赵朴,滕蔓,张改平. 2015

[9]马立克氏病病毒(MDV)814株糖蛋白B(gB)基因的克隆及序列分析. 刘长军,王端,赵晓岩,鄢明华,代春铭. 2000

[10]三株鸡马立克氏病病毒流行毒株基因组重复区的序列测定及分析. 许娜娜,刘长军,张艳萍,李志杰,侯广玉,张锋,丛锋,杨文闯,成云. 2011

[11]4株鸡马立克氏病病毒国内分离株Meq基因的克隆与序列分析. 施维松,刘长军,张艳萍,秦运安,张晓巍,李晶梅,陈洪岩. 2008

[12]鸡马立克氏病病毒疫苗株对强毒株的复制抑制作用. 郑永胜,张艳萍,李志杰,郑惠文,谭成章,刘长军. 2014

[13]MDV Meq-clustered miRNAs基因缺失BAC克隆株的构建及其体外增殖特性. 余祖华,丁轲,滕蔓,迟佳琦,宿靖伟,程相朝. 2015

[14]马立克氏病病毒VP22基因siRNA筛选体系的构建. 缪德年,王秀花,姜法铭,陈溥言,樊生超. 2006

[15]马立克氏病病毒致弱毒株的致病性及致瘤相关基因序列分析. 侯广玉,刘长军,张艳萍,杨玉英,张锋,丛锋,杨文闯,许娜娜. 2011

[16]血清I型马立克氏病病毒被膜蛋白UL11在真核细胞内的表达. 贾雪波,范建华,苗晋锋. 2010

[17]带有REV-LTR片段的MDV野毒株GX0101 BAC克隆的构建及拯救病毒的致病性分析. 孙爱军,PETHERBRIDGE,Lawrence,ZHAO,YuGuang. 2009

[18]鸡肿瘤病料中马立克氏病病毒和禽网状内皮组织增生症病毒共感染的研究. 张志,崔治中,姜世金,周蛟. 2003

[19]我国部分地区蛋鸡群ALV-J及与REV、MDV、CAV混合感染检测. 秦立廷,高玉龙,潘伟,邓小芸,孙芬芬,李凯,祁小乐,高宏雷,刘超男,王笑梅. 2010

[20]血清Ⅰ型马立克氏病病毒被膜蛋白UL11在真核细胞内的表达. 贾雪波,范建华,苗晋锋. 2010

作者其他论文 更多>>

微信小程序