香菇草酰乙酸水解酶基因LeOAH1克隆及表达分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 段应策

作者： 段应策;胡姿仪;杨帆;李金涛;邬向丽;张瑞颖

作者机构：

关键词： 香菇;草酰乙酸水解酶;基因克隆;生物信息学分析;原核表达

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2020 年 009 期

页码： 227-234

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 草酰乙酸水解酶(Oxaloacetate acetylhydrolase/Oxaloacetate hydrolase)是香菇(Lentinula edodes)中草酸合成的关键性酶,克隆香菇LeOAH1,并分析其在香菇体内与体外的表达情况,旨为研究香菇LeOAH1的功能奠定基础.从香菇L808中克隆LeOAH1,并进行生物信息学分析,采用 RT-PCR 和高效液相技术检测 LeOAH1在不同pH条件下香菇菌丝内的表达情况和草酸含量.此外,构建了重组原核表达载体 pET28a-oah1,在大肠杆菌中进行体外表达.基因克隆结果表明,该基因的gDNA长度为1 906 bp,cDNA长度为 1 356 bp,编码氨基酸数量为451个,蛋白分子质量约为48.9 kD,等电点为 6.80.生物信息学分析表明:该酶为不稳定的疏水性蛋白,具有α-螺旋(40.08%)、无规则卷曲(34.59%)、延伸链(17.52%)、β-折叠(7.10%)4种二级结构;亚细胞定位在细胞质中;序列比对的结果显示该酶有保守结构域;系统发育树分析该蛋白,与日本香菇OAH的相似度最高,同源性为82%;其次是灰光柄菇,同源性为64%.RT-PCR、HPLC的结果显示:在不同pH条件下,随着pH增加,LeOAH1基因表达量增加,香菇草酸分泌量也随之增加.而大肠杆菌中诱导表达的蛋白分子量符合预测结果.初步明确了香菇草酰乙酸水解酶的基因特性以及表达规律,以及与草酸分泌的关系.

分类号： S646.12

  • 相关文献

[1]芝麻抗裂蒴基因SiIND1的克隆与原核表达. 刘艳阳,武轲,梅鸿献,杜振伟,崔承齐,江晓林,郑永战. 2020

[2]野葛钙离子依赖性核酸酶PlCaN基因克隆和生物信息学分析. 郭坤元,林先明,何美军,郭汉玖. 2018

[3]魔芋软腐病pelD和pelE基因的克隆与表达分析. 陈恩发,刘辉,丁海兵,潘牧,王启富. 2021

[4]棉花GhRGL基因克隆及其原核表达研究. 廖文彬,郑银英,彭明. 2008

[5]香菇低温胁迫应答基因的克隆及其表达分析. 冯志勇,米朔甫,赵明文,陈明杰,李军辉,谭琦,潘迎捷. 2006

[6]乌桕硬脂酰-酰基载体蛋白脱饱和酶基因的克隆及表达. 牛蓓,徐莺,宋君,郭晓恒,符佳,邹亮,陈放,高孝锦,郭静. 2016

[7]枣树水通道蛋白基因生物信息学分析及原核表达载体的构建. 张洁,杨大威,孟玉平,赵玉云,曹秋芬. 2010

[8]猪细胞因子信号传导抑制因子1蛋白的表达纯化与多克隆抗体制备. 夏爽飞,陈鑫鑫,乔松林,柴书军,罗雪刚,谢莎,张改平. 2019

[9]美丽硬仆骨舌鱼Raf激酶基因的克隆、组织表达及原核表达分析. 刘奕,杨叶欣,刘超,宋红梅,汪学杰,牟希东. 2021

[10]田鼠巴贝斯虫棒状体蛋白相关因子1基因的原核表达及其特性研究. 蒋艺佳,肖雯雯,聂政,敖阳思琦,李慕晓,何沛,周金林,赵俊龙,贺兰. 2019

[11]'圣心'杧果实TPS13基因表达分析及酶功能验证. 王明珠,王亮,霍婷,黄小镂,丛汉卿,罗海燕,乔飞,姜成东. 2024

[12]砀山酥梨果实COMT基因的克隆和表达分析. 程敏,尹梅,邹鹤伟,金青,闫冲冲,林毅,张金云,徐义流,蔡永萍. 2015

[13]细粒棘球绦虫乳酸脱氢酶基因的生物信息学分析及原核表达. 赵文卿,薄新文,普娜,张玉霞,陈旭珂,张艳艳,孙艳,齐萌,王正荣. 2024

[14]小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达及其生物信息学分析. 苗书魁,任方,汪萍,米晓云,陆桂丽,魏玉荣,魏婕,马文戈,王延,黄炯. 2017

[15]细粒棘球绦虫EGR-07243和EGR-07244基因生物信息学分析及原核表达. 贾新月,马静,张艳艳,马勋,王正荣,薄新文. 2023

[16]非洲猪瘟病毒D250R蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备. 许春梅,邵明珠,王心悦,林佳迪,郭建雄,张祥胤,童德文,梁瑞英,赵晓民. 2022

[17]猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3C的原核表达及生物信息学分析. 罗亚坤,梁琳,朱禹,王静,刘琪,刘存,崔尚金. 2017

[18]布鲁氏菌LPS合成相关重要蛋白的生物信息学分析及per基因的克隆表达. 孙天浩,易德武,张倩,李楠,苗玉和,王震,陈创夫. 2022

[19]羊口疮病毒青海QH02株ORF011基因的克隆、原核表达及鉴定. 耿嘉谦,贾怀杰,陈国华,何小兵,房永祥,景志忠,王晓霞. 2019

[20]'红象牙'果实MiHPL基因的表达分析及酶活性鉴定. 黄小镂,雷亚欣,黄建峰,罗海燕,乔飞,丛汉卿,陈业渊. 2022

作者其他论文 更多>>

微信小程序