流行性乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒和寨卡病毒四重Luminex xTAG检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孙俊颖

作者： 孙俊颖;伍绮文;李吉初;李春红;郭鹏举;黄艺;尹飞飞

作者机构：

关键词： 虫媒病毒;流行性乙型脑炎病毒;西尼罗病毒;黄热病毒;寨卡病毒;液相芯片;Luminex xTAG技术

期刊名称： 广东农业科学

ISSN： 1004-874X

年卷期： 2024 年 51 卷 010 期

页码： 78-87

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】黄病毒科虫媒病毒引起的人畜共患传染病对我国畜牧业及公共卫生造成严重影响。虫媒病毒种类多且感染症状相似，临床监测工作繁重，建立4种危害严重的黄病毒科虫媒病毒快速、高通量检测技术为其诊断和流行病学监测提供技术支撑。【方法】利用Luminex xTAG技术，针对流行性乙型脑炎病毒（JEV）5'UTR、西尼罗病毒（WNV）5'UTR及部分C基因、黄热病毒（YFV）5'UTR和寨卡病毒（ZIKV）NS5基因保守区，设计4对特异性引物并对引物进行TAG和Biotin修饰，以标准毒株为模板，进行多重PCR扩增；将扩增产物与带有反向TAG序列的不同编号荧光MagTAG磁珠、链霉亲和素R-藻红蛋白进行核酸杂交反应，利用Luminex 200系统检测磁珠荧光信号和藻红蛋白荧光信号，对病原进行分类和定量检测。【结果】建立了能特异性检测JEV、WNV、YFV和ZIKV的四重Luminex xTAG方法，其最优引物工作浓度为0.5、0.5、0.75、0.5 μmol/L；杂交工作体系为磁珠工作液20 μL、PCR扩增产物5 μL、SAPE报告缓冲液75 μL；杂交温度为37℃，杂交时间为30 min，pH值为8.0；该检测方法特异性好且不与登革病毒等其他虫媒病毒发生交叉反应。重复性试验结果表明，Luminex xTAG方法的批内变异系数为2.50%～5.63%，批间变异系数为3.61%～12.50%。四重Luminex xTAG方法对JEV和ZIKV的检测限为1×10～4 copies/μL，对WNV和YFV的检测限为1×103 copies/μL，其检测WNV、YFV和ZIKV的灵敏度较常规PCR高10～100倍。用Luminex xTAG方法和RT-qPCR方法检测209份临床样品和模拟样品，JEV、WNV、YFV、ZIKV符合率为100%。【结论】建立的四重Luminex xTAG方法具有高通量、高特异性和灵敏度、成本效益高的优点，可为虫媒病毒临床诊断和流行病学监测提供一种高通量技术手段。

分类号： S852.65

  • 相关文献

[1]寨卡病毒结构蛋白基因的原核表达及其多克隆抗体的制备. 张经伟,王晗,刘靖,马乐,李伟,步志高,华荣虹. 2020

[2]浅谈绵羊蓝舌病的发生、诊断及防控. 张建胜,朱元芳,南景东,陈国旺,郭立宏,金振华,王嘉厚,付龙. 2024

[3]4种重要外来病毒高通量液相芯片检测方法的建立. 仇汝龙,阮智杨,胡波,魏后军,范志宇,宋艳华,陈萌萌,徐为中,王芳. 2021

[4]动物病原高通量检测技术. 朱丽萍,颜世敢. 2011

[5]液相芯片及其在粮油主要真菌毒素同步检测中的应用. 李鑫,李培武,张奇,张文,张兆威. 2012

[6]6种人兽共患病病原核酸液相芯片检测体系的建立. 王艳,沈家红,蒋蔚,张磊萍,张强,林颖峥,熊炜,李树清. 2018

[7]五种重要致病性弧菌高通量液相芯片检测方法的建立. 郭容,董晓妹,别闯南,王权,韩先干,叶建强,蒋蔚. 2021

[8]利用130K液相芯片分析中国蚕豆种质资源遗传多样性. 张红岩,敏玉霞,滕长才,彭小星,陈志凯,周仙莉,娄树宝,刘玉皎. 2024

[9]7种猪繁殖障碍性疫病液相芯片快速检测方法的建立与应用. 邬旭龙,肖璐,杨苗,谢礼,安微,郭杨,张琴,王印,林华. 2023

[10]基于50K液相芯片分析贵州香稻资源遗传多样性. 吴娴,王倩,吴朝昕,阙涛,吴钱蓉,龙武华,彭强,朱速松. 2025

[11]基于120K液相芯片对310份小麦种质的遗传多样性分析. 程斌,丁延庆,曹宁,高旭,徐建霞,罗永露,张立异,王伟. 2024

[12]西尼罗病毒NS1基因的原核表达与抗原性鉴定. 马健男,杨涛,王群,张维军,徐青元,田野,林燕,宋红梅,步志高,吴东来. 2009

[13]西尼罗病毒prM基因可溶性表达与抗原性鉴定. 赵晶,秦永丽,孙恩成,杨涛,徐青元,耿宏伟,王凌凤,蔡绪禹,魏鹏,王文世,步志高,吴东来. 2010

[14]西尼罗病毒NS1与E基因重组腺病毒的构建及免疫原性研究. 刘二战,赵国辉,孙恩成,崔焕忠,杨涛,徐青元,孙晶,孙亮,席娜. 2014

[15]西尼罗病毒C基因可溶性表达与抗原性鉴定. 孙恩成,杨涛,徐青元,耿宏伟,王凌凤,蔡绪禹,赵晶,秦永丽,魏鹏,王文世,步志高,吴东来. 2010

[16]表达西尼罗病毒E蛋白重组腺病毒的构建及鉴定. 张翠云,赵晶,陈韬,孙恩成,刘霓红,杨涛,徐青元,王文世,魏鹏. 2013

[17]西尼罗病毒NS1蛋白特异性单克隆抗体的制备与鉴定. 马健男,杨涛,徐青元,孙恩成,林燕,刘霓红,杨银辉,李文京,步志高,吴东来. 2011

[18]西尼罗病毒NS1蛋白特异性单克隆抗体的制备. 马健男,杨涛,徐青元,孙恩成,林燕,步志高,吴东来. 2010

[19]表达绿色荧光蛋白的复制缺陷型西尼罗病毒的构建. 李伟,马乐,郭立平,王晓磊,步志高,华荣虹. 2017

[20]表达西尼罗病毒囊膜糖蛋白PrM/E重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究. 杨洁,温志远,葛金英,王金良,华荣虹,邵钰,步志高. 2015

作者其他论文 更多>>

微信小程序