KLF3基因3′-UTR区双荧光素酶报告载体及其突变载体的构建与活性鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 翟博

作者： 翟博;李旭;王春昕;赵云辉;孙铭;张立春;张明新

作者机构：

关键词： KLF3基因;双荧光素酶基因报告载体;miR-21;3′-非编码区

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2017 年 44 卷 03 期

页码： 644-650

收录情况： 北大核心

摘要： 试验旨在构建锌指蛋白3(KLF3)基因3′-UTR区双荧光素酶基因报告载体及其突变载体,初步分析可能调控KLF3基因表达的miRNAs。首先通过PCR方法扩增KLF3基因的3′-UTR序列,将其克隆到经XhoⅠ、NotⅠ双酶切的双荧光素酶报告载体中;运用Targetscan软件预测可能与KLF3基因3′-UTR相互作用的miRNA;使用脂质体2000转染试剂将miRNAs mimics与构建好的KLF3基因3′-UTR段双荧光素酶报告载体或突变载体共转染于常规培养的293T细胞中,检测荧光素酶活性。结果表明,KLF3基因3′-UTR可能是miR-21的作用靶位点;双荧光报告显示,miR-21 mimics组(0.6900±0.0144)比突变组(1.000±0.0688)和空白对照组(1.000±0.0159)KLF3基因3′-UTR双荧光素酶基因报告载体和突变载体的活性降低了31%(P<0.01)。本试验成功构建了含有KLF3基因3′-UTR段双荧光素酶基因报告载体与突变载体,初步证实miR-21对KLF3基因有调控作用。

分类号： Q78

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