一种筛选无青蟹呼肠孤病毒(MCRV)种蟹的荧光定量RT-PCR检测方法及其应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 储旭

作者： 储旭;房文红;刘志强;周俊芳;李信书;李新苍

作者机构： 江苏海洋大学江苏省海洋生物资源与环境重点实验室;农业农村部东海渔业资源开发利用重点实验室中国水产科学研究院东海水产研究所

关键词： MCRV;检测方法;青蟹种蟹;定量RT-PCR

期刊名称： 渔业科学进展

ISSN： 2095-9869

年卷期： 2023 年 05 期

页码： 172-181

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 青蟹呼肠孤病毒(mudcrabreovirus,MCRV)是养殖拟穴青蟹(Scyllaparamamosain)致死率最高的病原之一，青蟹种蟹及其幼体携带该病原对青蟹养殖产业的高质量发展造成了重大威胁。为从源头切断该病原的感染和传播，本研究研发了一种筛选无MCRV种蟹的荧光定量检测方法。为最大限度地提高检测灵敏性，首先，本研究分析MCRV在感染青蟹主要组织中的含量，发现血淋巴中病毒载量最高；随后，分析该病毒的13个预测基因在血淋巴中的表达水平，发现病毒VP11基因相对表达量最高；最后，基于VP11基因序列保守区设计特异引物，建立了一种SYBRGreen quantitativereverse-transcriptionPCR(qRT-PCR)检测方法，该方法可精确检测的病毒下限为50 copies/反应。该检测方法具有组织和靶标基因选择优势，灵敏性显著高于早期报道的其他检测方法。使用该方法对含有5种常见甲壳动物病原的样品进行检测，均无特异性扩增。抽取微量血淋巴(大约50μL/只)提取RNA，随后使用该检测方法对22只种蟹和20只市售青蟹进行MCRV检测，阳性率分别54.44%和85.00%。此外，利用该方法进一步分析了MCRV在较低温度下(21℃)在青蟹体内的增殖情况，发现病毒感染早期MCRV呈指数方式增殖，随后进入平台期，实验周期内无青蟹死亡。总之，本研究建立了一种灵敏性高、实用性强的MCRV检测方法，既可用于微创条件下无MCRV种蟹筛选，也能满足病原感染相关研究的需要。

分类号： S945

  • 相关文献

[1]草莓miR390基因及其启动子的鉴定与表达分析. 李贺,毛健鑫,戚华彩,张志宏,纪明山. 2014

[2]甘蓝型油菜木质素合成关键基因F5H、4CL和COMT的定量表达. 李扬,顾慧,戚存扣. 2013

[3]红掌基因PFT1/MED25类基因AaPFT1的克隆与表达分析. 任保兰,牛俊海,张凌,何嘉琦,张东雪. 2016

[4]剑麻内参基因筛选与稳定表达分析. 张燕梅,王瑞芳,杨子平,鹿志伟,李俊峰,赵艳龙,陆军迎,周文钊. 2019

[5]猪ADSL基因克隆及其在部分组织中的mRNA定量表达. 刘基伟,徐日福,李奎,白丽景,应正宙,唐中林,杨述林. 2010

[6]核桃Y_2SK_2型脱水素基因JrDHN的克隆、表达和单核苷酸多态性分析. 徐丽,陈新,魏海蓉,张力思,宗晓娟,王甲威,朱东姿,刘庆忠. 2014

[7]马铃薯X病毒研究进展. 陈虞超,聂峰杰,张丽,巩檑,甘晓燕,石磊,宋玉霞. 2016

[8]紫苏叶中甲胺磷的残留检测方法. 赵云,秦信蓉,赵利晖,熊方宇. 2015

[9]清镇市某奶牛场牛结核的检测与净化. 吴位珩,宋大书,田孟林,杨莉,杨茂生,孙启跃,徐景峨. 2014

[10]茶叶咖啡碱检测方法-紫外分光光度法的改进与探讨. 刘晓霞,周国兰,何萍,郑文丽,赵华富. 2010

[11]浅谈土壤常规检测中的几个关键环节. 林媚. 2017

[12]牛病毒性腹泻流行现状的研究. 姜玲玲,周思旋,史开志,徐洪忠. 2014

[13]鸡T淋巴细胞功能的检测方法研究进展. 刘胜旺. 2000

[14]新农药米满、锐劲特在甘监上的残留试验. 段婷婷,陈才俊,秦立新,廖国会,陈湘燕. 2006

[15]稻茬免耕油菜除草剂在土壤中的消解动态. 段婷婷,魏进,叶照春,何永福. 2013

[16]氨基糖苷类药物的危害及其检测方法研究进展. 高月,王耀,胡骁飞,邓瑞广,侯玉泽. 2016

[17]马铃薯黑痣病多重实时定量PCR检测方法的建立. 陈恩发,卢扬,彭慧元,雷尊国,邓宽平. 2014

[18]DP-305423转基因大豆PCR检测方法研究. 吕智超,李飞武,周宁,闫伟,王丕武,张明. 2011

[19]HPLC-VWD法测定猪粪中喹乙醇的残留. 李维,王冉,魏瑞成,张宁,王恬. 2009

[20]进口大豆中菜豆晕疫病菌巢式PCR检测方法的建立. 杨万风,刘艳,刘翔,邵沛泽,谌运清,赵文军. 2015

作者其他论文 更多>>

微信小程序