东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 贾人初

作者： 贾人初;孙毅;刘金明;傅志强;苑纯秀;石耀军;陆珂;孙焕;李浩;林矫矫

作者机构：

关键词： 东方田鼠;肝脏;T7噬菌体展示cDNA文库

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2008 年 30 卷 01 期

页码： 5-9

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本项研究的目的是构建东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因奠定基础。用TRIzol试剂提取东方田鼠肝脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上EcoRⅠ/HindⅢ定向接头并用EcoRⅠ和HindⅢ酶切,使其两端分别带EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端。用Mini Column纯化、收集300bp以上的双链cDNA片段,再连接于带有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7Select10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库。经测定,库容量为1.3×107PFU/mL,扩增后文库滴度为1.8×1011PFU/mL。对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91.7%,阳性克隆片段大小分布在200bp～1000bp,其中有95.5%的插入片段大于300bp。用日本血吸虫童虫可溶性抗原对文库进行了初筛,得到了21个ESTs,将这些阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养,其中大部分克隆诱导的童虫死亡率比阴性噬菌体对照高出2%～13%。

分类号： Q78

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